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Campioni possono essere ottenuti in tre modi:
- Raschiando l’esocervice con una spatola modificata (la spatola di Ayre o una variante di questa). Questo è il metodo frequentemente usato in Europa per ottenere materiale per preparare gli strisci cervicali.
- Utilizzando una spazzola endocervicale per campionare l’endocervice.
- Usando attrezzi simili a spazzole per campionare sia l’endocervice che l’esocervice. Questi sono in genere utilizzati per preparare gli strisci. Alcuni di questi strumenti sono stati modificati per la preparazione di citologia su strato liquido (LBC).
Le fasi successive sono essenenziali per assicurare che il Pap Test venga compiuto correttamente
- Lo speculum deve essere inserito in vagina e la cervice chiaramente visualizzata. L’ostio cervicale deve essere ben visualizzato.
- Gli strumenti per la campionatura usati dovrebbero essere selezionati secondo la forma le dimensioni della cervice e della localizzazione della giunzione squamocolonnare. Una spatola di Ayre è appropriata per campionare la cervice in una donna di pluripare; comunque una spatola o una spazzola possono essere utilizzate in donne in post menopausa dove la giunzione squamocolonnare si trova all’interno del canale di endocervicale.
- L’estremità appuntita della spatola dovrebbe essere inserita nell’ostio cervicale nelle donne nullipara e ruotata fino alla fine della spatola. Lo strumento deve essere ruotato di 360 gradi per rimuovere le celle dalla regione della zona di trasformazione , dalla giunzione squamocolonnare e dal canale endocervicale.
- Il materiale sulla spatola o sulla spazzola deve essere immediatamente trasferito su di un vetrino identificato con il nome del paziente e la data di nascita.
- Il vetrino deve essere immediatamente fissato con un appropriato fissante (alcool 95%) e i vetri poi trasportati al laboratorio citologico in contenitori per la successiva processazione e colorazione.
- Campioni presi per la Citologia su Base Liquida devono essere processati seguendo rigorosamente le avvertenze Dopo il campionamento della cervice l’estremità dello strumento usato deve essere spezzata all’interno del recipiente per il trasporto e la processazione.
- Una descrizione particolareggiata di campionatura cervicale può essere trovata nella sezione di Tranining numero 3 (Programma di citotraining: la procedura del Pap Test).
Fixation of Pap smears
Proper fixation is an essential step in the preparation of cervical smears. It ensures that the cells are well stained and clearly displayed for microscopic analysis and preserved for immediate and future review. Fixation can be achieved by complete immersion of the slide in one of alcohol fixatives listed below for 15-20 minutes after which the slide can be removed from the fixative and transported to the laboratory for staining. Alternatively, fixation can also be achieved by spray fixation. Spray fixative consist of an alcohol base and carbowax that provides a thin protective waxy coat over the slide. The carbowax must be removed by immersion in alcohol before staining.
A satisfactory fixative has to meet several requirements.
1. It should penetrate the cell rapidly so that detailed cell morphology is maintained.
2. Cell shrinkage should be minimal and uniform so that morphological distortions do not occur .
3. It should allow permeability of dyes across the cell boundaries and appropriate for the staining method used
4. It should permit cell adhesion to the glass microscope slide
5. It should be bactericidal, non toxic and permanent..
The following fixatives are suitable for the fixation of cervical smears which are to be stained by the Papanicolaou method.
- 95% ethanol (for optimal fixation)
- 80% isopropanol
- 95% denatured alcohol (90 parts 95% ehanol, five parts absolute methanol and five parts absolute isopropanol)
- Reagent grade alcohol (absolute methanol, 80%isopropanol, 90% acetone)
Fixation must be immediate. The smear must not be allowed to dry before fixation.