Παράρτημα

1) Esposti’s ???????

???????? ????:

100 ml ??????????? ????
45 ml ????????
10 ml ??????????? ????? ???
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2) ?????????? ???????????

0.01M ???????????? ???? ?? ??????? ?????????? ??????  (PBS), pH 7.2 -7.4.

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????????? ??????, 8.7g
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????? ????????? ????????, 1.136g
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????? ????????? ????????.2H2O, 1.41g
?
????? ????????? ????????.12 H2O, 2.83g

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0.05M Tris-buffered saline (TBS)

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3) ???????? ???????????

PBS (???? ????????) ???????? 0.1% ????????? ?????? ???? n ??? 0.1% ?????? ???????

 

4) ?????????? ???????????

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5) ??????????? ??????????? ?????????? ?????????????

??????????? ??? ????????? ?? ????????/PBS ??????????? ??? ????????????? ??????????????.

?????????????

30% ??????????? ?????????, 1 ml
70% ???????? ?? PBS, 100 ml
(0.3% ??????????? ?????????)

???????

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6) ?????-????????? ???????? ?????????

0.01M ??????? ?????????? ???????, pH 6.0

??? 2 ?????:

?????????????

??????? ???, 3.8g
2 M ?????????? ??????? (8% aq)

???????

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Tris/EDTA ?????????? ???????, pH9.0

?????????????

???  1 ????? (10 ????? ????????????)
????(???????????)??????????,  12 g
Ethylene-diamine tetra-acetic acid, disodium salt, dehydrate, 1 g
1 M ??????????? ???, ??????? 500 ml
????, 500 ml

???????

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7) ??????? ????????????????? ??? ???????? ????????????? (Pelliniemi et al, 1965)

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3,3’-Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) (e.g. Sigma-Aldrich D5637)  50 mg
PBS 100 ml
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DAB ?????? ?? ??????????? ?? ????????? ? ?? ????????? ??? ???????? ??? ?????????? ???????. ??? ?????????? ?? ????????????? ?? ???? ???, ????????  ????????? 5g ? 25 g ??? ????????? ?? ???????? ?? ?????, ???????? ??? ?? ???????? ?? ??????????? ???? ??? ??? ????????? ???? ?????????? ??? ???????? 50 mg DAB/ml. ???????? (?? ???????) ??? 15 ????? ?? ??? ???????, ?????? ????????? ?? ???????? ??? ????????? ??? ????????? ???? ??? ?? ???? ??? ?????. ??? ??????????, ???????? ??? 5 ml ??? ??? ????????? 500 ml ? ???????? ??? 1 ml ??? ??? ????????? 100 ml ??????? 0.05% ?????????? ???????. ??????? ?? ???????? ??? ???????????? ?? ?? ????????? -20°C ??? ??????????. ??? ?????, ????????? ??? ???????? ??? ????????? DAB ???? ????????? ???? PBS. ????????? ??????????? ????????? ??? ??? ????????? 0.03%, ???????? ???? ??? ??????? ??? ???????????????? ?????? ??? 10 ?????. ????????? ?? PBS ??? ?????? ?? ????, ??? ?????????? ?? ??? ???????? ?????.

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8) ?????????????????? ?????????? ?????? – ??????????? ???????

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TBS ?????? ?? ?????????????? ??? PBS ?????? ?? ?????????? ??? ??????????.

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    ????????? ??? ???????????????? ?????? ?? PBS ??? ?????? ?? ?????????? ????. ??????? ??????????? ??????? ?? ???????????? ?? ??? ?????? ?????, ??????????????? ??? ????? ??????? ??? “blueing” ??? ?????????. ?????????? ???? ?????????????? ????????, ????????? ?? ?????? ??? ??????? ?? ????? ??????? ??? ????????? ??????.

 

9) ???-???????????????? ??????? ??  Sequenza™ ??????

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???? ?????? ?? ???????? ??????? 100 µl ?????????? ??????????? ??? ??????????????? ?????.

? ???????? ??? ????????????? ??? ? ???????? ????? (??????????????? Mayer’s Haemalum, ??? ??? ?????????? ?????????????) ??????? ?? ?????? ???? ?? ?????? Sequenza, ????? ?? ????????? ??????? ???????? ??????? ???? ???????????. ????????? ?? ????????????? ????????? ???? ?????? ?? ??? ???? ????? ???? ?? ?? ??????????????? ??????? DAB ??? ??????????? ??????.

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