This content is also available in:
English 
Italiano 
Español 
Magyar 
Polski
Stádia práce v cytologické laborato?i:
- P?íjem materiálu a pr?vodky
- P?id?lení ?ísla v laborato?i
- Zadání pacientky a údaj? nát?ru do po?íta?e
- Barvení, montování a zna?ení skel
- Nát?ry screenovány primárním screenerem
- Všechny nát?ry kontrolovány sekundárním screenerem a abnormální p?edány patologovi.
- P?íprava zprávy a p?edání zadavateli.
- Informování pacientky o výsledku testu.
- Zajišt?ní odpovídajícího postupu v p?ípad? abnormálního výsledku.
P?íjem vzorku
- P?i p?íjmu prrobíhá kontrola materiálu a prr?vodky, zda se shodují údaje. Vzorek dostává ?íslo vyšet?ení, pop?. ?árový kód.
- Nát?ry jsou p?ipraveny pro barvení dle Papanicolaoua
- Po obarvení jsou nát?ry montovány v DPX mediu a kryty krycím sklem (optimální velikost 22x50mm).
- Montovací medium ponechat zaschnout. Následn? kompletovat s pr?vodkou a odeslat k primárnímu screeningu.
Barvení podle Papanicolaoua
Po mnoha letech experiment? Dr. Papanicolaou vyvinul trichromatické barvení , které p?etrvalo s minimálními modifikacemi až do sou?asnosti a je akceptovaným barvením pro cytologické preparáty. (Papanicolaou 1942: A new procedure for staining vaginal smears Science 95,438). Pro dosažení optimálního výsledku nesmí nát?ry v pr?b?hu celé procedury oschnout- p?ed fixací ani v pr?b?hu barvení.
Papanicolaouovo barvení
| # | Procedure | Time | Comment |
|---|---|---|---|
| 1 | Odstranit polyethylenglykol carbowax fixativum v 50% alkoholu | 2 min’s | Nedostate?né odstran?ní carbowaxu zast?e bu?ky a nedá se již snadno odstranit |
| 2 |
Opláchnout ve vod? |
1 min |
Zajist?te kompletní hydrataci |
| 3 | Barvení v Harrisov? Haematoxylinu | 5 min’s |
doba barvení j závislá na složení hematoxylinu |
| 4 | Opláchnout ve vod? | 2 min’s | nenavázaný hematoxylin je odstran?n |
| 5 | Diferencovat v 0.5% vodním roztoku kys. chlorovodíkové | 10-20 sec’s | _ |
| 6 | Opláchnout v tekoucí vod? | 2 min’s | _ |
| 7 | Mod?it v Scottov? náhražce tekoucí vody | 1 min | Hn?dá barva kyselého haematinu se m?ní na modrou/modro?ernou slab? alkalickým roztokem. 8 |
| 8 | Opláchnout ve vod? | 2 min’s | Odmyjte pe?liv? alkalické soli |
| 9 | Dehydratace 70% alkoholem | 2 min’s | Dehydratace vzestupnými alkoholy |
| 10 | Dehydratace 95% alkoholem | 2 min’s | |
| 11 | Dehydratace 95% alkoholem | 2 min’s | |
| 12 | Barvení Oranží G6 (OG6) | 2 min’s | |
| 13 | Opláchnout v 95% alkoholu | 2 min’s | |
| 14 | Opláchnout v 95% alkoholu | 2 min’s | |
| 15 | Opláchnout v 95% alkoholu | 2 min’s | |
| 16 | Barvit Gillovým roztokem EA30 solution | 3 min’s | |
| 17 | Opláchnout v 95% alkoholu 3x | 1 min | |
| 18 |
Projasnit v xylenu 3x a montovat v DPX |
1 min | Do montování ponechat xylenu |
Resulting stain:
- Nuclei- blue black
- Cytoplasm- non keratinised blue and effete red
- blood cells- green
- Cytoplasm (keratinised)- pink
- Red cells- orange
Výsledek správn? provedeného barvení by m?l zachovat transparentní kvalitu cytoplazmy a oz?ejmit chromatinovou strukturu jader.
Poznámka k barvení dle Papanicolaoua
Papanicolaouovo barvení je polychromatické barvení, které zahrnuje jaderné barvení (haematoxylin) a dv? dobarvení (Oranží G a EA polychromem). Hydratace fixovaného nát?ru je podmínkou obarvení jader haematoxylinem, zatímco dehydratace je p?ipraví pro dobarvení. Modifikace barvení jsou obvyklé, protože každá laborato? preferuje vlastní odstín. Adjustace spo?ívají v modifikacích ?as? pro hematoxylin a EA polychrom. Dalšími faktory ovliv?ujícími výsledek jsou vyvážení barev a složení tekoucí vody, teplota, pHf vzorku a po?et nát?r? v barvicí lázni. Pokud je jaderný detail dob?e definován a transparence cytoplasmy je zachována, mezilaboratorní barevné variace lze akceptovat. Každá laborato? by však m?la mít reproducibilní barvicí postup.
Papanicolaouovo barvení m?že být progresivní nebo regresivní.
V progresivní metod? je intensita jaderného barvení kontrolována pono?ením do mod?ícího roztoku po odpovídajícím obarvení hematoxylinem. Nejobvyklejší je mod?ící ?inidlo Scottovo – náhražka tekoucí vody (pH 8.02), roztok hydroxidu amonnného a lithiumkarbonátu. (kohoutková voda m?že být použita, má-li odpovídající pH). Progresivní barvení zabarvuje cytoplasmu pouze velmi lehce.
V regresivním barvení je jádro zám?rn? p?ebarveno neokyseleným
hematoxylinem. P?ebyte?né barvení je odstran?no roztokem z?ed?né kyseliny solné. Odbarvující kyselina je následn? odstran?na pono?ením do tekoucí kohoutkové vody. Podstatný je v této metod? ?as, jinak m?že vzniknout hypochromatické jádro. Cytoplazma je rovn?ž zcela odbarvena. Harris?v hematoxylin je obvykle kombinován s regresivní barvicí metodou. Gill?v nebo Mayer?v hematoxylin se používá zpravidla v progresivních barvicích metodách. Podstatné je si uv?domit, že d?ležit?jší je pH roztoku, než to, zda je použita regresivní nebo progresivní metoda.
Orange G je kyselé barvivo, které barví bazické proteiny jako prekeratin r?žov?. Orange G má rovn?ž silnou afinitu pro keratin, který barví jasn? oranžov?. Tím se stává d?ležitým markerem abnormální keratinizace cervikálního a vaginálního epitelu, který se vyskytuje nap?. p?i prolapsu a infekcích virem bradavic. Je rovn?ž citlivým markerem dob?e diferencovaného dlaždicového karcinomu hrdla. Je t?eba mít oplachovací lázn? ?iré a ?asto m?nit barvicí roztoky, jinak bude jaderné a cytoplazmatické barvení nedokonalé.
EA je polychromatické barvení , které je kombinací sv?tlé zelen?, SF žluti a eozinu Y. Barví cytoplasmu metabolicky aktivních bun?k (jako nap?. parabazálních, intermediárních, leukocyt? a histiocyt?, jakož i nádorových bun?k) sv?tle zelen?.
Nicmén?, barevný výsledek metody dle Papanicolaoua je závislý nejen na použité modifikaci, ale i komer?ním zdroji reagencií a pH vzorku. Nelze tedy toto barvení považovat za stoichiometrické, a?koli korelace mezi materiály barvenými dle Papanicolaoua a Feulgena je dle publikovaných sd?lení velmi dobrá.
Pro další informace o Papanicolaouov? barvení a obecn? technikách p?ípravy preparát? konzultujte Chapter 34 , Cytopreparatory Techniques by CM Keebler in Comprehensive Cytopathology (1996) editor M Bibbo pub Saunders
Screening a zpráva
- Protokol screeningu byl m?l být schválen manažerem laborato?e. Musí být uplatn?na hlediska kontroly kvality a pracovní zát?že screener?.
- K získání kvalifikace je zásadní, aby cytotechnolog vid?l široké spektrum p?ípad?. Laborato? by m?la zpracovávat alespo? 15,000 cervikálních st?r? ro?n? a každý screener by m?l denn? screenovat 50 -80 nát?r? s p?estávkami po hodin? práce. Má mít vlastní pracovní místo a binokulární mikroskop.
- Nát?ry by m?ly být screenovány pomocí zv?tšení 10x objektiv a 10x nebo 12x okuláry. Celé sklo by m?lo být screenováno jedním zv?tšením pole za polem s vyšet?ením celé plochy pod krycím sklem. Za?íná se zpravidla v rohu a sklo screenuje krok za krokem, jak znázorn?no níže.
- Bylo zjišt?no, že p?i použití malého zv?tšení vyšet?í screener 250-300 polí ve screenovaném preparátu a pr?m?rn? k tomu pot?ebuje 6-10 minut (rozsah 5 -20 minut)
- K ozna?ení bun?k pro rescreening se používá objektiv 4x . V laborato?i by m?l být zaveden protokol ke zna?ení bun?k.
- K prohlížení polí s obsahem speciálního zájmu se užívají objektivy 20x a 40x .
- S každým st?rem musí být dodána pr?vodka a historie cervikálního screeningu. P?ed screeningem ji screener prostuduje.
Terminologie a principy popisování cervikálních st?r?.
- Cytologický nález musí být p?esný a výstižný, tak aby jeho obsah byl jasn? srozumitelný odb?rateli vzorku a všem zdravotnickým, technickým a administrativním profesionál?m angažovaným ve screeningu cervikálního karcinomu.
- Terminologie musí sd?lovat odpovídající klinickou informaci zadavateli vyšet?ení. Obecn? je p?ijímáno, že se toho docílí nejspíše , je-li zpráva psána volnou formou , protože zkratkovité nálezy jsou zdrojem možné misinterpretace. Z tohoto d?vodu jsou numerické klasifika?ní systémy Papanicolaouova (1954) zapovídány.
Zpráva má p?t oddíl?
- Má být uveden typ vzorku, nap?. cervikální st?r, endocervikální kartá?ek nebo LBC .
- Ohodnocení adekvátnosti (kvality) vzorku, tj. zda je dostate?ný pro hodnocení.
- Zpráva má obsahovat stru?né hodnocení cytologických nález? v obecn? užívaných a srozumitelných pojmech.
- V p?ípad? abnormálního cytologického nálezu by m?l být p?edpov?zen p?edpokládaný patologický nález cervixu.
- Pátou nepovinnou ?ástí nálezu je návrh dalšího postupu.
- Cytolog by m?l p?i formulaci nálezu vzít v úvahu všechny klinické údaje o pacientce.
- Všechny abnormální st?ry musí být popsány patologem nebo kvalifikovaným cytopatologem s licencí pro gynekologickou cytologii.